Обращённо-фазная хроматография
Термин «обращённо-фазовая» имеет под собой историческую подоплёку. В 1970-х годах для жидкостной хроматографии в большинстве случаев использовалась твёрдая стационарная фаза (также называемая «колонка»), которая содержала немодифицированные кремниевые или алюминиевые наполнители. Сегодня этот метод известен как «нормально-фазовая хроматография». В случае нормально-фазовой хроматографии стационарная фаза гидрофильна (обладает большим сродством к гидрофильным молекулам в подвижной фазе). Поэтому гидрофильные молекулы в подвижной фазе имеют тенденцию связываться (адсорбироваться) на колонке, в то время как гидрофобные молекулы проходят сквозь колонку и элюируются в первую очередь. В нормально-фазовой хроматографии гидрофильные молекулы могут быть элюированы с колонки путем увеличения полярности раствора подвижной фазы.
Появление методов, использовавших алкильные цепи, ковалентно связанные с твёрдой основой, позволили создать гидрофобную неподвижную фазу, имеющую сильное сродство к гидрофобным соединениям. Использование гидрофобной неподвижной фазы может рассматриваться как противоположность или «обратное» по отношению к нормально-фазовой хроматографии — отсюда и произошёл термин «обратно-фазовая хроматография». Обратно-фазовая хроматография использует полярную (водную) подвижную фазу. В результате, гидрофобные молекулы в полярной мобильной фазе адсорбируются на гидрофобной неподвижной фазе, а гидрофильные молекулы в мобильной фазе будут проходить через колонку и элюироваться в первую очередь. Гидрофобные молекулы могут быть элюированы с колонки путём уменьшения полярности мобильной фазы, используя органические (неполярные) растворители, которые снижают гидрофобные взаимодействия. Чем более молекула гидрофобна, тем сильнее она свяжется с неподвижной фазой и тем выше концентрация органического растворителя, которая потребуется для элюирования этой молекулы.
Многие математические и экспериментальные предположения, используемые в других хроматографических методах, также применимы в ОФХ (например, «разрешение разделения» зависит от длины колонки). Она также может использоваться для разделения большого количества видов молекул. Этот метод обычно не используется для разделения белков, потому что используемые органические растворители могут денатурировать большинство белков. Поэтому, в данном случае нормально-фазная хроматография является более приемлемым методом.
Сегодня ОФХ часто используется в аналитических целях. Существует целый ряд различных неподвижных фаз для ОФХ, что позволяет быть более гибким в выборе методов разделения.
Обращённо-фазная хроматография
Из Википедии — свободной энциклопедии
Обращённо-фазовая (обратно-фазовая) хроматография (ОФХ) — вариант хроматографии, в котором стационарная фаза является неполярной. [1] Этот вариант хроматографии относится к жидкостной хроматографии (в отличие от газовой).
Термин «обращённо-фазовая» имеет под собой историческую подоплёку. В 1970-х годах для жидкостной хроматографии в большинстве случаев использовалась твёрдая стационарная фаза (также называемая «колонка»), которая содержала немодифицированные кремниевые или алюминиевые наполнители. Сегодня этот метод известен как «нормально-фазовая хроматография». В случае нормально-фазовой хроматографии стационарная фаза гидрофильна (обладает большим сродством к гидрофильным молекулам в подвижной фазе). Поэтому гидрофильные молекулы в подвижной фазе имеют тенденцию связываться (адсорбироваться) на колонке, в то время как гидрофобные молекулы проходят сквозь колонку и элюируются в первую очередь. В нормально-фазовой хроматографии гидрофильные молекулы могут быть элюированы с колонки путём увеличения полярности раствора подвижной фазы.
Появление методов, использовавших алкильные цепи, ковалентно связанные с твёрдой основой, позволили создать гидрофобную неподвижную фазу, имеющую сильное сродство к гидрофобным соединениям. Использование гидрофобной неподвижной фазы может рассматриваться как противоположность или «обратное» по отношению к нормально-фазовой хроматографии — отсюда и произошёл термин «обратно-фазовая хроматография». [2] [3] Обратно-фазовая хроматография использует полярную (водную) подвижную фазу. В результате, гидрофобные молекулы в полярной мобильной фазе адсорбируются на гидрофобной неподвижной фазе, а гидрофильные молекулы в мобильной фазе будут проходить через колонку и элюироваться в первую очередь. [2] [4] Гидрофобные молекулы могут быть элюированы с колонки путём уменьшения полярности мобильной фазы, используя органические (неполярные) растворители, которые снижают гидрофобные взаимодействия. Чем более молекула гидрофобна, тем сильнее она свяжется с неподвижной фазой и тем выше концентрация органического растворителя, которая потребуется для элюирования этой молекулы.
Многие математические и экспериментальные предположения, используемые в других хроматографических методах, также применимы в ОФХ (например, «разрешение разделения» зависит от длины колонки). Она также может использоваться для разделения большого количества видов молекул. Этот метод обычно не используется для разделения белков, потому что используемые органические растворители могут денатурировать большинство белков. Поэтому, в данном случае нормально-фазная хроматография является более приемлемым методом.
Сегодня ОФХ часто используется в аналитических целях. Существует целый ряд различных неподвижных фаз для ОФХ, что позволяет быть более гибким в выборе методов разделения.
1.4 Основные типы хроматографических систем в ВЭЖХ
запись создана: 06.11.2010 / последнее обновление: 06.11.2010
По типу используемых сорбентов, механизмам сорбции, протекающим на границе раздела фаз и составу элюента, жидкостную хроматографию можно разделить на несколько вариантов ее реализации:
1. Нормально-фазовая,
2. Обращенно-фазовая,
3. Ионо-обменная,
4. Эксклюзионная (ситовая, гель-проникающая).
Данный перечень включает только наиболее распространенные и часто встречающиеся варианты ЖХ, хотя наибольшее количество аналитических задач в хроматографии (до 98 %) решается с использованием первых трех вариантов.
Кроме приведенной классификации, существует разделение вариантов ЖХ на основе реализуемых в хроматографической системе механизмов сорбции. Так, например, различают хроматографию: адсорбционную, распределительную, ион-парную, гидрофобную, гидрофильную и т.д. Тем не менее, учитывая, что среди хроматографистов до сих пор нет единого мнения о механизмах протекания взаимодействия разделяемых веществ с сорбентом даже в относительно простых сорбционных системах, такая классификация достаточно условна. Более того, следует признать, что сорбционные взаимодействия крайне редко протекают по какому-то одному механизму. Чаще проявляется одновременно несколько механизмов сорбции. Следует также учесть, что в одних и тех же условиях один из компонентов пробы может удерживаться на сорбенте по одному механизму, а другой – по совершенно иному.
Нормально-фазовая (НФ) хроматография – исторически первый вариант ЖХ. Основной его отличительной особенностью является более высокая полярность поверхности сорбента по сравнению с элюентом.
В качестве сорбента используется либо силикагель, либо сорбенты на его основе с полярными группами (амин-, нитрил-, диол- и т.п.), химически пришитыми на поверхность. Гораздо реже используют другие неорганические вещества с полярной поверхностью: оксид алюминия, оксид циркония, силикат магния и т.п.
Элюентом служат смеси органических растворителей. Элюотропный ряд с увеличением силы элюента строится от наименее полярных к более полярным веществам:
Двухкомпонентные элюенты без модификаторов, содержащие значительные количества воды, в нормально-фазовой хроматографии практически не используются. Однако, при введении в водосодержащий элюент специальных модифицирующих добавок, например – солей, на силикагеле, например, можно реализовать интересные режимы разделения, и такие хроматографические системы находят в настоящее время все большее применение.
Обращенно-фазовая (ОФ) хроматография – вариант, когда сорбент является неполярным, а элюент – полярным. То есть, по отношению к нормально-фазному режиму – все наоборот. Это и дало основание так назвать этот вид ЖХ, который является самым распространенным из всех существующих.
В качестве сорбента для ОФХ чаще всего используют силикагель, с химически пришитыми к его поверхность алкильными группами разной длины (октадецил, гексадецил, октил, бутил, метил) и другими неполярными молекулами (фенил). В последнее время все чаще применяются сорбенты на основе двуокиси циркония, углерода и органических полимеров, например, сверхсшитого полистирола, сополимера стирола с дивинилбензолом и т.п. В ОФ режиме могут использоваться также и сорбенты, предназначенные для НФ-хроматографии (амино- и нитрилсиликагель), в этом случае их свойства в плане удерживания (коэффициента емкости) близки к этил- или пропилсиликагелю, но селективность разделения может существенно отличаться.
Элюентом в этом режиме являются смеси воды (или водных растворов солей) с водосовместимыми органическими растворителями. Сила элюента увеличивается от самого полярного растворителя (вода), к самому неполярному.
Вода;
Метанол;
Ацетонитрил;
Этанол;
Тетрагидрофуран;
Изопропанол, пропанол;
Диоксан, этилацетат, эфир.
Ионо-обменная хроматография – предназначена, в основном, для разделения неорганических ионов и ионогенных органических веществ.
В качестве сорбентов используются ионообменные смолы или сорбенты на основе силикагеля с химически модифицированной поверхностью, на которой сформированы функциональные группы, способные к ионному обмену.
Эксклюзионная хроматография – пожалуй, наиболее сильно отличается от других видов ЖХ как по принципу разделения, так и по методическим особенностям. Предназначена она преимущественно для разделения крупных молекул и частиц, в частности – полимеров, в соответствии с их размером. При этом сорбции веществ как таковой не происходит, а разделение обеспечивается за счет способности более мелких молекул в процессе продвижения с потоком элюента по колонке заходить в мелкие поры сорбента, увеличивая тем самым длину своего пути в колонке. Крупные молекулы из-за своих размеров попасть в мелкие поры не могут и вынуждены совершать свой путь по колонке с «заходом» в гораздо более широкие поры, а то и вообще без проникновения в поры сорбента. Благодаря этому длина пути в колонке крупных молекул (частиц) оказывается наименьшей, и они выходят раньше более мелких, а те, в свою очередь, выходят раньше еще более мелких, разделяясь при этом исключительно по размерам.
Если есть возможность и нет необходимости разделять вещества именно по размерам их молекул, то эксклюзионной хроматографии стоит предпочесть любой другой вид ЖХ, поскольку эксклюзионная хроматография наиболее бедна в плане наличия степеней свободы для воздействия на хроматографический процесс.
Элюентом может служить любой растворитель, который хорошо растворял бы образец и обеспечивал на данном сорбенте отсутствие сорбции («отрицательную» сорбцию) компонентов пробы. Это как раз тот вариант, когда элюент может быть однокомпонентным. На силикагелевых сорбентах часто используют тетрагидрофуран, ацетон, дихлорэтан. На полимерных – спирты, воду и их смеси.
Обращенно-фазовая распределительная хроматография
Вариант распределительной хроматографии, в котором используют сорбенты с привитыми неполярными, как правило, длинными алкильными или алкилсилильными группами (а также фенильными, аминопропильными и др.) и полярный растворитель (например, водно-метанольные, водно-ацетонитрильные смеси) получил название обращенно-фазовой ВЭЖХ. Этот термин, указывает на перемену полярности неподвижной и подвижной фаз на противоположные в данном варианте ВЭЖХ.
Существует принципиальное различие между процессами сорбции на полярных поверхностях из относительно неполярных растворителей (НФХ) и сорбции из воды либо сильнополярных растворителей на неполярных поверхностях (ОФХ). В первом случае между молекулами сорбатов и неподвижных фаз образуются ассоциаты за счет кулоновских взаимодействий или водородных связей. Во втором случае причиной ассоциации на поверхности являются так называемые сольвофобные взаимодействия в подвижной фазе. Для полярных ПФ, в особенности содержащих воду, характерно сильное кулоновское взаимодействие и образование водородных связей между молекулами растворителей. Все молекулы в таких растворителях связаны довольно прочно межмолекулярными силами. Для того чтобы поместить в эту среду молекулу сорбата, необходимо образование «полости» между молекулами растворителя. Энергетические затраты на образование такой «полости» лишь частично покрываются за счет взаимодействия полярных групп в молекуле сорбата с полярными молекулами растворителя. В аналогичном положении по отношению к растворителю находятся и неполярные молекулы неподвижной фазы. С энергетической точки зрения более выгодно такое положение, когда поверхность раздела между полярной средой (растворителем) и неполярными фрагментами неподвижной фазы и молекул сорбата минимальна. Уменьшение этой поверхности и достигается при сорбции.
Метод ОФХ в настоящее время является доминирующим в ВЭЖХ. Среди рутинных методик анализа 70-80% основаны на том или ином варианте ОФХ. Причины широкого внедрения метода в том, что для него налажено производство сорбентов, имеющих привитые алкилсилильные группы разной длины (от С2, до С18 с прямой алкильной цепью, фенильной и дифенильной группами), а растворители, используемые для этого метода (ацетонитрил, метанол, ТГФ, вода), позволяют работать с оптическими детекторами в УФ и видимом диапазоне спектра, так как они прозрачны в УФ свете.
Пределы прозрачности ПФ в зависимости от состава и химической чистоты модификатора лежат в области 190-220 нм. Наиболее доступный УФ детектор в условиях ОФХ приближается по возможностям к неселективному универсальному детектору, делая возможным анализ углеводов, липидов, сложных эфиров, спиртов и олефинов.
Растворители, используемые в ОФХ, относительно легко растворяют многие практически важные органические и природные вещества, находящиеся в организме человека, биологических объектах, в пище, лекарственных препаратах, и т.д.
Сорбенты в обращенно-фазовой ВЭЖХ быстро приходят в равновесие с новыми растворителями и при изменении состава растворителя, что позволяет без проблем переходить от одной методики к другой с использованием одной и той же колонки, а также широко применять градиентное элюирование с быстрым восстановлением равновесия сорбента с исходным растворителем. Сорбенты дают возможность использовать растворители в широком диапазоне свойств, а также добавки разных типов (соли, кислоты и основания, ион-парные реагенты, органические модификаторы).
Следует иметь в виду, что характеристики удерживания и селективности для обращенно-фазовых сорбентов меняются не только при переходе от сорбента одного производителя к сорбенту другого (например, от силасорба С18 к партисилу ОДС), формально имеющих одинаковую привитую фазу. Эти характеристики меняются более или менее значительно даже при переходе от одной партии сорбента к другой партии того же производителя. Исходные силикагели, используемые разными фирмами, заметно различаются по поверхности, объему и размеру пор. Для прививки фаз с общим названием С18 или ОДС применяют разные и по структуре, и по химической однородности реагенты. Например, для получения привитой фазы ОДС (октадецилсилан, ODS) используют октаде-цилтрихлорсилан, метилоктадецилдихлорсилан и диметилоктадецилхлорсилан. Если используют ди- или трифункциональные силаны, то в зависимости от степени безводности растворителей и силикагеля, на поверхности может получиться мономерная пленка фазы (монослой) или же полимерная (чем больше воды, тем выше степень полимеризации). Свойства мономерной и полимерных пленок с разной степенью полимеризации изрядно различаются. Наконец, силанольные группы, находящиеся на поверхности исходного силикагеля, к которому прививается фаза, не могут из-за пространственных затруднений быть полностью замещены. Например, диметилоктадецилсилильными группами в самых жестких условиях прививки удается заместить примерно половину силанольных групп. Остающиеся силанольные группы не удается полностью устранить даже в процессе так называемого «эндкеппинга» (окончательного покрытия поверхности силикагеля), когда используют молекулы более активного низкомолекулярного силана (обычно триметилхлорсилана). Силанольные группы на поверхности такого привитого сорбента могут взаимодействовать с некоторыми компонентами пробы и в ряде случаев являются фактором удерживания, конкурирующим с сольвофобными процессами.
Наряду с неполярными привитыми фазами, выпускаемыми специально для ОФХ, в обращенно-фазовом варианте часто используют нитрильную и аминную привитые фазы, а иногда и диольную. В этом случае они разделяют вещества в основном по сольвофобному механизму, как имеющие короткий (C3) привитой алкилcилан, а полярные группы или не участвуют в разделении, или играют второстепенную роль, несколько меняя селективность для ряда веществ определенной химической структуры.
Одна из важных причин, способствовавших быстрому росту применения обращенно-фазовых сорбентов в ВЭЖХ, это их способность четко разделять серии гомологов в порядке возрастания их молекулярной массы. При этом гомологи могут, в отличие от разделяемых методами ЖАХ или НФХ, не иметь функциональных групп, т.е., обращенно-фазовый сорбент может разделять гомологи алканов, аренов, фенолов и т.д. Это вовлекает в область анализа методом ВЭЖХ такие важные объекты, как компоненты нефти и продукты нефтехимии. Если нужно разделить вещества неполярные или малополярные, практически любой обращенно-фазовый сорбент может при относительно простом подборе растворителя обеспечить почти идентичное разделение.
3.1.1. Обращенно-фазовая ВЭЖХ (ОФ ВЭЖХ)
Обращенно-фазовый вариант ВЭЖХ (ОФ ВЭЖХ) имеет ряд преимуществ перед другими вариантами жидкостной хроматографии:
– это очень гибкий метод, так как, изменяя состав водноорганических смесей, используемых в качестве подвижной фазы, можно на одной колонке обеспечить разделение соединений различной природы;
– селективность данного метода почти всегда значительно выше, чем других вариантов хроматографии для всех соединений, кроме сильнополярных
– при использовании гидрофобизированных силикагелей быстро устанавливается равновесие между подвижной и неподвижной фазой, эти сорбенты отличаются высокой эффективностью разделения;
– можно осуществлять разделение соединений, растворимых как в воде, так и в органических растворителях;
– возможность использования в подвижной фазе буферных растворов может улучшить селективность и эффективность разделения ионогенных соединений.
В зависимости от способа обработки свойства гидрофобизированных силикагелей могут изменяться, поэтому свойства коммерческих колонок различных фирм несколько отличаются. Содержание углерода составляет 5-20%. Степень покрытия поверхности силикагеля органическим модификатором составляет 10-60%, в лучших случаях она достигает 90%. Наличие остаточных силанольных групп приводит к тому, что
адсорбционный и ионообменный механизмы удерживания всегда сопутствуют обращенно-фазовому. Для уменьшения числа силанольных групп сорбенты дополнительно обрабатывают триметилхлорсиланом (это называют эндкеппингом). В табл. 12 представлены типичные обращеннофазовые сорбенты. Наиболее популярными являются силикагели следующих торговых марок: бондопак, лихросорб, порасил, сепарон, сферисорб, нуклеосил, кромасил. Недостатками обращенно-фазовых сорбентов на основе силикагеля являются ограниченно допустимый диапазон рН и сорбционная активность силанольных групп. Этого недостатка в значительной степени лишены колонки нового поколения фирмы «Феноминекс», ее колонка Луна С 18 обладает стабильностью в диапазоне значений рН 1,5-10.
Механизм разделения соединений в этом варианте хроматографии пока до конца неясен. Наиболее удачными и распространенными являются теория, использующая представления о параметрах растворимости Гильдебранта, и сольвофобная теория Хорвата-Меландера. По теории, основанной на параметрах растворимости Гильдебранта, удерживание определяется молекулярными взаимодействиями разделяемых веществ с подвижной и неподвижной фазой. Зависимость фактора емкости вещества от состава подвижной фазы описывается уравнением
ln k = Aφ 2 + Bφ + C (12),
где φ – объемная доля органического компонента (модификатора) в подвижной фазе, А, В и С – константы.
Однако поведение соединений сложного строения с несколькими функциональными группами часто не удается описать данной зависимостью. Более адекватно закономерности удерживания сорбатов в ОФ ВЭЖХ описываются сольвофобной теорией. Хорвартом и Миландером впервые было показано, что водные элюенты, не содержащие
Таблица 12. Сорбенты для обращенно-фазовой ВЭЖХ
органических растворителей, могли быть использованы для разделения полярных биологических молекул на октадецилсиликагеле. Даже при отсутствии органического компонента в элюенте, взаимодействие между растворенным веществом и привитыми углеводородными радикалами
неподвижной фазы, являлось причиной удерживания растворенного вещества. Что позволило сделать вывод о том, что удерживание в обращено-фазовом варианте в основном определяется гидрофобными взаимодействиями.
Важнейшую роль в понимании механизма удерживания обращеннофазовой хроматографии сыграли работы Хорвата и его школы. Суть теории Хорвата заключается в следующем. Существует принципиальное различие между процессами сорбции на полярных поверхностях из относительно неполярных растворителей («нормально-фазовый режим») и сорбции из воды либо сильнополярных растворителей на неполярных поверхностях («обращенно-фазовый режим»). В первом случае, между молекулами сорбатов и неподвижных фаз образуются ассоциаты за счет кулоновских взаимодействий или водородных связей. Во втором случае, причиной ассоциации на поверхности являются так называемые сольвофобные взаимодействия в подвижной фазе. Для полярных подвижных фаз, в особенности содержащих воду, характерно сильное кулоновское взаимодействие и образование водородных связей между молекулами растворителей. Все молекулы в таких растворителях связаны довольно прочно межмолекулярными силами. Для того чтобы поместить в эту среду молекулу сорбата, необходимо образование «полости» между молекулами растворителя. Энергетические затраты на образование такой «полости» лишь частично покрываются за счет взаимодействия полярных групп в молекуле сорбата с полярными молекулами растворителя. В аналогичном положении по отношению к растворителю находятся и неполярные молекулы неподвижной фазы. С энергетической точки зрения более выгодно такое положение, когда поверхность раздела между полярной средой (растворителем) и неполярными фрагментами неподвижной фазы и молекул сорбата минимальна. Уменьшение этой поверхности и достигается при сорбции (рис. 15).
Рис. 15. К механизму обращенно-фазовой хроматографии: а — сорбат в растворе; б — сорбат на поверхности неподвижной фазы. Молекулы воды и органического растворителя обозначены светлыми и темными кружками соответственно.
Обращенно-фазовая хроматография широко применяется не только для разделения нейтральных соединений, но и ионогенных веществ. В принципе, и для таких соединений процесс сорбции описывается сольвофобной теорией. Однако сорбаты такого рода существуют в растворе и адсорбированном состоянии, как в виде нейтральных молекул, так и в виде ионов. Каждой из этих форм соответствует свое значение фактора удерживания. В зависимости от рН среды изменяются соотношение различных форм в растворе и факторы удерживания.
В качестве подвижной фазы обычно используют смеси растворителей, т.к. это позволяет улучшить селективность и эффективность разделения и уменьшить время необходимое для его проведения.
Меняя состав подвижной фазы в ОФЖХ, можно изменять удерживание в очень широких пределах. Почти для всех анализируемых соединений удерживание в некоторых чистых растворителях (метанол, тетрагидрофуран) пренебрежимо мало, а в чистой воде чрезвычайно велико. Поэтому, чтобы добиться приемлемого времени удерживания,
обычно необходимо использовать смеси воды с органическим растворителем – так называемым модификатором. Зависимость фактора удерживания вещества от состава подвижной фазы описывается уравнением
где C – концентрация органического
компонента (модификатора) в
подвижной фазе, b и p – константы.
При постоянных условиях хроматографирования удерживание различных сорбатов определяется следующими факторами:
– объемом их молекул;
– уменьшением площади неполярной поверхности при сорбции.
При описании взаимосвязи удерживания и свойств сорбатов наиболее популярны уравнения, связывающие факторы удерживания, измеряемые в хроматографической системе, с коэффициентами распределения (чаще всего в системе октанол – вода). Для соединений близкой структуры наблюдается линейная зависимость между логарифмами коэффициентов
распределения ифакторами удерживания:
где Pi,j — коэффициент распределения вещества между водной и органической фазами.
Во многих случаях логарифм фактора удерживания линейно связан с
числом повторяющихся структурных фрагментов:
Самым распространенным дескриптором является число атомов углерода. Эти соотношения полезны как при подборе состава подвижной фазы
как при разделении, так и для идентификации компонентов смеси.
Система для проведения разделения методом ВЭЖХ состоит из нескольких блоков: насоса, дозатора, колонки, детектора и регистрирующего устройства.
Рассмотрим основные типы насосов, используемых в ВЭЖХ.
Шприцевые насосы. Вращение прецизионного синхронного двигателя преобразуется в перемещение поршня в цилиндре. При движении поршня подвижная фаза либо поступает в цилиндр, либо выдавливается из него. Преимущество данного типа насоса – практически полное отсутствие пульсаций потока подвижной фазы, недостаток – невозможность создания градиента с помощью одного насоса.
Рис. 16. Выбор условий ВЭЖХ с учетом гидрофобности разделяемых веществ
Для ввода пробы в жидкостной хроматографии используют следующие типы дозаторов:
– дозаторы с мембраной (без остановки потока и с остановкой
ячейку детектора компонентов. По сравнению с детектированием на одной длине волны, сравнение спектров, полученных в процессе элюирования пика, позволяет идентифицировать разделяемые компоненты с гораздо большей степенью достоверности.
Принцип действия флуориметрического детектора основан на измерении флуоресцентного излучения поглощенного света. Поглощение обычно проводят в УФ-области спектра, длины волн флуоресцентного излучения превышают длины волн поглощенного света. Флуориметрические детекторы обладают очень высокой чувствительностью и селективностью. Наиболее важная область их применение детектирование ароматических полициклических углеводородов.
детектора особенно важно при определении фенолов, фенольных соединений, гидразинов, биогенных аминов и некоторых аминокислот.
Кондуктометрический детектор используют для определения неорганических анионов и катионов в ионной хроматографии. Принцип его работы основан на измерении электропроводности подвижной фазы в процессе элюирования вещества.
Таблица 13. Детекторы для высокоэффективной жидкостной хроматографии, используемые в анализе объектов окружающей среды
